AG百家乐积分 中国之声丨常青说明: ARN中动态病毒载量监测和宏基因组学盘考
发布日期：2024-12-30 18:56 点击次数：152
编者按：急性视网膜坏死（ARN）是一种冷漠的感染性全葡萄膜炎，发扬为从临近环形向后极发展的坏死性视网膜炎、封闭性血管炎以及玻璃体炎[1]。ARN的常见病因是水痘-带状疱疹病毒（VZV），其次是单纯疱疹病毒1（HSV1）和单纯疱疹病毒2（HSV2）等疱疹病毒。眼内液团员酶链反应（PCR）可检测病原体、确诊ARN[1,2]；及时定量PCR也有助于监测抗病毒诊疗经由中ARN的进度[3,4]。连年来，宏基因组测序被掌握于眼内液检测中，其可通过检测特定基因或变异，以瞻望抵抗感染诊疗的可能耐药性[5,6,7,8]。可是AG百家乐积分，ARN中病毒基因组变异的情况、这些变异与临床发扬和抗病毒诊疗反应的干系性仍有待进一步盘考。此外，抗病毒诊疗中，早期的病毒载量弧线由平台期和对数衰减期构成[3,4,7]，病毒载量的平台期长度被合计与抗病毒诊疗的有用性、病毒的耐药性干系。可是，在ARN病例中尚阑珊可有用测量平台期长度的门径；既往盘考曾使用病毒载量下跌至运行载量一定比例所需时期来估量平台期长度，如较运行载量下跌0.5个log（下文简称T-0.5log）、下跌10%（下文简称T-10%）、下跌一半（下文简称T1/2）所需时期，但其准确性不解。近期，复旦大学附庸眼耳鼻喉科病院常青说明与周旻副主任大夫报导了VZV引起的ARN中动态病毒载量监测和宏基因组学盘考：动态病毒载量监测、计较病毒载量的平台期长度可匡助估量ARN患者抗病毒诊疗时期坏死性视网膜炎的病程长度；宏基因组测序有助于检测病原体的感染和基因变异，RNR基因的功能缺失变异（loss-of-function）可能导致VZV病毒毒力镌汰。现在，该盘考效果已在RETINA杂志上负责发表。
盘考门径
该盘考为雅致性病例系列盘考。
01
入排圭臬
入选圭臬：①PCR说明病原为VZV的ARN病例；②抗病毒诊疗经由中病毒载量检测≥4次。
抛弃圭臬：①基线时房水量不及，无法进行宏基因组测序；②未能完成抗病毒诊疗或在眼部缓解前失访。
02
抗病毒诊疗有预备
确诊ARN后，入手眼部+全身抗病毒诊疗。
眼部诊疗：更昔洛韦玻璃体内打针（每周2次）→直到行径性视网膜炎缓解or视网膜脱离需要手术。
全身诊疗：阿昔洛韦静脉用药14天后改为伐昔洛韦口服给药3-6月。
03
临床评估
视网膜坏死的限制：（图1）
Zone 1：锯齿缘-赤谈部（绿色）；
Zone 2：赤谈部-黄斑外3000μm&视神经外1500μm（红色）；
Zone 3：黄斑外3000μm&视乳头外1500μm（黄色）。
图1 视网膜坏死分区
视网膜病程：为视网膜炎的执续时期，即入手抗病毒诊疗→坏死性视网膜炎皆备缓解之间的往往停止。诊疗经由中不雅察并纪录视网膜脱离的发生情况。
04
病原学和病毒载量检测
每次玻璃体内打针前，通过前房穿刺术取得房水。
第1次打针（D1）时，50μL房水用于PCR检测病原体类型（HSV1、HSV2、VZV、EBV、CMV）。若是检测到VZV，则在眼部抗病毒诊疗的第1天（D1）、第3天（D3）或第4天（D4）、第1周（W1）、第2周（W2）、第3周（W3）和第4周（W4）对集聚的房水进行病毒载量检测；关于每位患者，将不同时期点的房水标本保存在-80°C，终末一皆全部检测，以尽量减少系统迤逦的影响。
05
病毒载量弧线拟合
使用MATLAB的弧线拟合用具分析病毒载量的趋势（图2）。
图A：平滑样条弧线（绿色）用于可视化病毒载量弧线的趋势。
图B-E：按照以下口头拟合指数弧线（玄色虚线）。为减少平台期的影响，拟合出更接近对数衰减期的指数弧线，从基线入手从前去后一一转除点（红叉）；如进一步抛弃后R2值莫得权贵增多，或剩余测量点少于3个，则罢手抛弃；(D)中的弧线被合计是对数衰减期的最好拟合弧线，因为(E)中进一步抛弃并莫得导致R2值权贵增多。
图F：最终瞻望的病毒载量弧线由平台期弧线（以绿色样条弧线默示）和对数衰减期弧线（以玄色指数弧线默示）构成。以两头弧线接壤两点的中点（以蓝色点默示）算作病毒载量由平台期参预对数衰减期的拐点。
由基线至拐点的时期即为瞻望的平台期长度（简称为拐点时期，Tinflection）。同期，ag百家乐解密按既往盘考门径计较其他的平台期瞻望值：T-0.5log、T-10%、T1/2。
06
宏基因组测序
第1次打针（D1）时，另外50μL房水用于宏基因组测序。
由于病毒胸苷激酶（TK）、DNA团员酶（DNA pol）和核糖核苷酸收复酶（RNR）基因与抗病毒药物的活性关联[8,9]，将VZV基因组中的DNA pol基因、TK基因和RNR基因序列与NCBI VZV基因组参考序列（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NC_001348.1）进行比对，以检测这些基因的变异。
盘考效果
01
东谈主口学特征
共纳入20东谈主（10男10女）20眼（10右10左），平均年纪52±10岁，平均随访时期13±6月（95% CI：10-16月）。
基线视网膜坏死的限制：4眼仅累及Zone 1；11眼累及Zone 1+2；5眼累及Zone 1+2+3。
病程及预后：13眼的坏死性视网膜炎达到缓解，缓解的平均时期为5±3周（95% CI：3-7周）；其余7眼在视网膜炎缓解之前发生视网膜脱离。共14眼发生视网膜脱离，发生视网膜脱离的中位时期为6.0周（IQR：3.0-7.0周，range：1.5-24.0周）。
02
病毒载量分析
2.1 抗病毒诊疗经由中病毒载量测量的趋势（图3）
抗病毒诊疗入手后，病毒载量总体呈指数下跌趋势。
病毒载量的对数与诊疗时期呈负线性干系（P
图3 抗病毒诊疗经由中病毒载量测量的趋势
散点默示不同时期点病毒载量的对数；每个神采代表一个患者；虚线间的灰色区域为拟合线的95% CI
2.2 病毒载量弧线的时期参数
病毒载量到达拐点的时期（Tinflection）：平均4.2±1.6天（95% CI：3.4-4.9天）。
病毒载量减半的时期（T1/2）：中位数8.3天（IQR：6.0–8.9天，range：1.7–19.6天）。
病毒载量下跌10%的时期（T-10%）：中位数4.2天（IQR：1.0–6.4天，range：0.3–15.9天）。
病毒载量下跌0.5log的时期（T-0.5log）：中位数：9.6天（IQR：8.4–11.5，range：6.1–21.4天）。
使用Friedman检会对4个时期参数进行比拟，效果标明：Tinflection短于T-0.5log（PPP >0.999，Bonferroni adjustment）。进一步分析发现，11眼中T-10%Tinflection。这些效果标明：
T-0.5log和T1/2位于对数衰减期。
T-10%可位于病毒载量弧线拐点之前或之后。
2.3 视网膜病程与病毒载量弧线时期参数的干系性
使用Spearman干系分析评估坏死性视网膜炎病程与病毒载量弧线时期参数的干系性，视网膜炎病程与Tinflection干系(P=0.025，Spearman ρ=0.617)，但与T-10%、T1/2和T-0.5log无关（P分裂=0.942、0.716、0.662）。这些效果标明：
Tinflection可能有助于估量坏死性视网膜炎的病程
03
宏基因组测序
3.1 qrtPCR病毒载量与宏基因组测序读数的干系性（图4）
VZV读数与qrtPCR测定的病毒载量正干系（P=0.024，Spearman correlation）。
图4 qrtPCR病毒载量与宏基因组测序读数的干系性
3.2 VZV基因变异情况
DNA pol基因、TK基因、RNR亚基1（RNR1）基因和RNR亚基2（RNR2）基因共检测到31个变异，其中同义变异13个，错义变异15个，插入变异1个，无义变异2个；去除同义变异后，DNA pol基因、TK基因和RNR1基因的非同义变异分裂为10个、2个和6个（表1）。各基因、变异之间无权贵的干系性。
表1 宏基因组测序检测VZV基因变异情况
3.3 VZV基因变异与病毒载量、时期参数、临床发扬的干系性
VZV RNR1基因c.2144C.A (p.S715*) 无义变异的ARN患者的运行病毒载量低于无该变异的ARN患者（中位数：1.3×107copies/mL vs 1.1×108copies/mL；P=0.005，FDR-adjusted P=0.030）。
各变异均不影响视网膜病程、T1/2、T-10%、T-0.5log、Tinflection。
基线视网膜坏死分区、视网膜脱离发生率、BCVA与基因变异间无权贵干系性。
盘考论断
动态病毒载量监测可瞻望病程长度，诊疗初期不合乎指数下跌趋势的载量数据可用于瞻望平台期的长度（即Tinflection），该参数可匡助估量ARN患者抗病毒诊疗时期坏死性视网膜炎的执续时期。
宏基因组测序有助于检测病原体的感染和基因变异，病毒DNA序列的读数与病毒拷贝数正干系，但无法平直反应拷贝数。
RNR基因的功能缺失变异（loss-of-function）可能导致VZV病毒毒力镌汰；但本盘及第所检出的VZV变异尚未发现与临床病程或疾病进度干系。
参考文件
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论文作家
常青 说明
复旦大学附庸眼耳鼻喉科病院 说明、主任大夫、博士生导师、玻璃体视网膜疾病学科主任
中国大夫协会眼底病学组委员
中华医学会眼底病学组委员
中国医药提拔协会眼科专科常委
中国女大夫协会眼科专科委员
《中华眼底病杂志》、《眼科大查房》等杂志编委
周旻 副主任大夫
复旦大学附庸眼耳鼻喉科病院 副主任大夫
擅长视网膜疾病的诊治，尤其是葡萄膜炎及各类眼内炎症性疾病的会诊和诊疗
顾骏祥
复旦大学附庸眼耳鼻喉科病院 主治大夫、眼科学博士AG百家乐积分