一、技艺详尽
单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism, SNP）是基因组中单个碱基的变异，在东谈主类基因组中叶俗存在，与疾病易理性、药物响应及个体化医疗等密切联系。通过特异性探针或深度测序精确识别SNP位点，提供基因分型、等位基因频率及功能展望分析，助力遗传机制研究与临床更始诈欺。
二、践诺主义
通过检测样本中指标SNP位点的基因型（如AA、AG、GG），分析其与表型（疾病、药物疗效、性状等）的关联性，为疾病研究、个体化用药等规模提供数据因循。
三、践诺进程
1、DNA抽提
a. 将样品管离心，10,000 rpm(~11,200xg)离心1 min,，弃上清，留住千里淀。
b. 加入200uL的缓冲液GA，之后，严格按照“TIANamp Genomic DNA Kit”讲明书范例，按细胞的样本类型进行索求DNA，详见讲明书附件。
c. 最终洗脱体积：50 uL
2、亚硫酸氢盐更始
a. 配制亚硫酸氢盐更始体系:取20 uL 基因组 DNA，加入130 uL CT Conversion Reagent，使用移液器轻轻奏乐混匀；
b. 将响应体系转念至热轮回仪中，98℃孵育 10 min，64℃孵育 2.5 h；
c. 响应放手后移时离心，收罗管壁溶液于管底，将响应液转念至 1.5 mL 离心管中；
d. 柱均衡：将 DNA Spin Column 置于 Collection Tube，向吸附柱中加入 500 uL Buffer BL，12,000 rpm离心 1 min，去除 Collection Tube 中的废液，将 DNA Spin Column 再行放回 Collection Tube 中；
e. 加入 600 μL Buffer GB，ag百家乐老板使用移液器奏乐混匀；
f. 将上一步所得溶液转念到 DNA Spin Column 中 12,000 rpm 离心 1 min，弃掉 Collection Tube 中液体，将 DNA Spin Column 放入 Collection Tube 中；
g. 加入 600 uL Buffer PW12,000 rpm 离心 1 min，弃掉Collection Tube 中液体，将 DNA Spin Column 放入 Collection Tube 中；
h. 加入 600 uL Buffer DB，室温遗弃 15 min，12,000 rpm离心 1 min 弃掉 Collection Tube 中液体，将 DNA Spin Column 放入 Collection Tube 中；
i. 加入 600 uL Buffer PW，12,000 rpm 离心 1 min，弃掉 Collection Tube 中液体，将 DNA Spin Column 放入 Collection Tube中；
j. 重迭范例 9；
k. 12,000 rpm 离心 2 min，将 DNA Spin Column 放入一新的的 1.5 mL 离心管中；
l. 将 DNA Spin Column 管盖大开，室温遗弃 5 min，使酒精十足蒸发；
m. 向 DNA Spin Column 中加入 20 uL Nuclease-free Water，室温静置 2 min；
n. 12,000 rpm 离心 2 min 即获得更始后 DNA。
3、PCR扩增
1）将Mix在4℃下熔化，温雅地险阻倒置混匀并进行移时离心。
2）冰上配制下表中的响应液
要素 加入量 终浓度
TaKaRa EpiTaq HS（5 U/μl） 0.25 μl 1.25 U/50 μl
10 × EpiTaq PCR Buffer (Mg2+ free) 5 μl
25 mM MgCl2 5 μl
dNTP Mixture（各 2.5 mM） 6 μl
Forward Primer (10μM) 1μL 0.2 μM
Reverse Primer (10μM) 1μL 0.2 μM
DNA 2μL
RNase-free Water To 50μL
3）将响应管进行移时离心，确保整个响应液在响应孔底部。
4）遴荐三步法范例进行响应：
轮回数 范例 温度 时代
40 预变性 98℃ 10s
退火 55℃ 30s
延迟 72℃ 30s
4、家具电泳
家具上样量：4uL
电泳条款为：120V电压，200mA电流，电泳时代30min.
四、技艺上风
高特异性：双引物诡计严格分裂甲基化与非甲基化DNA，幸免假阳性
高机灵度：可检测低至1%甲基化水平的DNA
世俗适用：因循多种样本类型（血液、组织、FFPE等）
恶果直不雅：凝胶电泳平直傲气甲基化现象，便于快速判读
五、适用边界
1️⃣ 肿瘤研究：抑癌基因（如p16、BRCA1）初始子甲基化检测
2️⃣ 疾病会诊：结直肠癌、肺癌等甲基化象征物筛查
3️⃣ 发育生物学：如胚胎发育中表不雅遗传调控机制理解
4️⃣ 环境毒理学：化学浮现对DNA甲基化影响的评估
5️⃣ 药物研发：去甲基化药物（如5-氮杂胞苷）疗效监测
六、代表性践诺恶果
MSP_琼脂糖凝胶电泳图
七、提供
1 细胞样品: ＞2×107；细胞培养上清≥1ml；
动植物组织/细菌、真菌样品: ＞100mg（黄豆粒大小）；
血清、血浆、全血尽头他体液样品: ＞200μl；
RNA/DNA/cDNA: v≥10μl，c≥50ng/μl
2 物种信息及基因信息
（注：组织样品需液氮速冻、保存于-80度ag竞咪百家乐，样品使用干冰寄送）